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細胞傳代的培養(yǎng)技巧

 更新時間:2024-02-22 點擊量:563
  細胞傳代的培養(yǎng)技巧
  細胞培養(yǎng)是指從體內組織取出細胞在體外模擬體內環(huán)境下,在無菌、適溫和豐富的營養(yǎng)條件下,使其生長繁殖,并維持其結構和功能的一種培養(yǎng)技術。那么你知道細胞傳代的培養(yǎng)技巧有什么嗎?讓我們一起來看看吧!
  一、選擇適合的細胞培養(yǎng)基:
  合適的細胞培養(yǎng)基是體外細胞生長增殖的重要條件之一,培養(yǎng)基不僅提供細胞營養(yǎng)和促使細胞生長增殖的基礎物質,而且還提供培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。
  二、根據(jù)細胞生長方式不同又分為貼壁細胞和懸浮細胞:
  貼壁細胞:必須貼附于支持物表面才能生長,見于各種實體瘤細胞;
  懸浮細胞:于懸浮狀態(tài)下即可生長,不需要貼附于支持物表面,見于各種造血系統(tǒng)腫瘤細胞。
  正常細胞形態(tài)較好,輪廓清晰,邊緣透亮,細胞增殖狀況良好。當貼壁細胞長到密度90%時,需進行傳代。
  貼壁細胞傳代:
  丟掉原有的培養(yǎng)基加入復溫的PBS潤洗兩次,吸掉PBS,加入胰酶消化細胞,顯微鏡下觀察,待細胞變圓,細胞間隙明顯,部分細胞剛開始漂浮的時候加入培養(yǎng)基,然后將細胞小心吹打下來,1000rpm/min室溫離心5min,棄上清,細胞沉淀用培養(yǎng)基重懸,按合適的密度分到幾個培養(yǎng)瓶中進行下一輪培養(yǎng)。
  對于較難消化的細胞,可以用2%利多卡yin消化5-8分鐘,然后再棄去,加培養(yǎng)基吹打也可以,對細胞的影響不大。
  懸浮細胞傳代:
  懸浮細胞傳代比貼壁細胞傳代操作步驟較簡單。因為細胞已經(jīng)懸浮在生長培養(yǎng)基中,所以無需進行酶處理即可將其從培養(yǎng)容器中取出,整個過程更快,對細胞的損傷更小。懸浮細胞多采用離心法傳代,細胞離心后去掉上層清液,沉淀細胞加新培養(yǎng)液后吹打混勻傳代。也可以直接稀釋培養(yǎng)瓶中的細胞并使其繼續(xù)擴增,或通過從培養(yǎng)瓶中取出一部分細胞并將剩余細胞稀釋至適合細胞系的接種密度。
  一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時,將細胞懸液移入離心管中,1000 rpm/min室溫離心5 min。棄上清,細胞沉淀用w全培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加w全培養(yǎng)液至4-5 ml,37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長,此時細胞生長狀態(tài)良好,當補液時,需避免反復吹打。
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